不产孢的真菌如何计算接种量呢?

2016-10-21技术资料

不产孢的真菌如何计算接种量,想利用摇瓶发酵获取真菌代谢物的最佳发酵条件,但目标菌非产孢真菌,如何确定接种量!

真菌接种

怎么确定这个菌不产孢子?仅靠平板培养不产孢子还是这个物种(物种分类学定义,不是菌种)不产?
 
你不是要摸索最佳发酵条件吗?接种量本身就是一个参数。不管是孢子接种还是菌丝接种都是一个数据,是根据你的发酵体系而定的数据,菌丝你可以离心称重。准确的话就做个干重与湿重曲线。不准确直接用湿重
当否?
 

这个问题很多童鞋都会遇到,丝状真菌生物量的测定一直困扰着大家。不过你做发酵,不需要太精确,只是看接种量的影响。那就用打孔器从培养好的平板上连同培养基一起接种,接种不同数量就可以了。

请问用湿菌丝称重如何保证不被污染,用打孔器打下菌饼接种有没有相关文献支持,谢谢
 

离心管事先称重,离心收集完菌体后弃去上清,称重。这些操作在超净台里完成就可以了。我没有做过丝状真菌接种,是楼上一个师兄在做,我手头没有这方面的文献,回头我可以帮你问一问他。

看样子我是被晾在一边了,那我就一边凉快去了,天热,还是凉快点的好。
 

冼亮淀粉酶 大侠,我顶你一下。这个情况我也遇到过,比如有的真菌虽然产孢,产在培养基内,或在载孢器里,难以用孢子接种来确定接种量,所以先谢谢冼亮淀粉酶 大侠,也期待郝钊 大侠的最新答复。

帖子别沉了,楼上几位的方法学习了,还有别的好方法吗?期待啊!
 

接种一定面积的带菌琼脂块,或者一定重量(换算干重)的新鲜菌丝。目前来说就是这两种个方法。都有文献支持的。

用打孔器就行了,很常规的做法
 

我们刚刚在做黑曲霉的发酵,啥都不懂,也是被生物量如何测定困扰着:(
我们的发酵液主要是木薯液化液,有很多木薯渣,如果用离心或者抽滤再称干重的话,大量木薯渣会和菌丝体混在一起。。。。于是我们想用一个只接种不发酵的空白,测一测发酵液的干重,再拿待测样品的干重一减当做菌体干重,其实这样也是非常不准的,毕竟单位体积里的木薯渣含量是不可能一样的。。。

 
这个实验的目的和设计是怎样的
是用黑曲霉做柠檬酸摇瓶发酵,碳源是木薯液化液(未去渣)。我们实验室之前没做过这块的,所以小弟完全是摸着石头过河,这才刚刚开始摸索发酵条件,想通过定时测菌体量来看看黑曲霉大概的生长曲线,找找对数期什么的,情况就是这样的。
 
为什么不去渣,用离心机离心一下不就没事了?
冼亮淀粉酶

木薯淀粉液化醪的成分也是挺复杂的,是由木薯淀粉粉碎之后过筛、调浆、加入耐高温alpha淀粉酶、高温蒸煮而得。耐高温alpha淀粉酶是由芽孢杆菌所产,最适作用温度超过90度,不是生淀粉酶,不能降解生淀粉。木薯生淀粉晶体在50度开始被破坏,随着温度升高,糊化速度加快,同时耐高温alpha淀粉酶活力上升。在蒸煮的过程中酶逐渐失活,最终得到液化醪。液化醪主要含有的糖的成分随淀粉酶的降解程度而异,在酒精生产中的液化醪主要含有麦芽寡糖、麦芽糖和少量葡萄糖。木薯淀粉的淀粉含量随木薯品种和季节而异,鲜木薯含量一般为30%,干品(约含10%水分)一般为70%甚至更高,剩下的都是纤维素木质素之类的不能利用的东西。离心也是可行的,但是有两个问题要注意:
1、会把一部分糖分也去掉,但是由于糖分都已经是可溶解了,所以去掉的不多
2、在中试的时候难操作,量多难操作,中试的发酵罐可能会有50升甚至两百升,需要的液化醪较多。
好处也是有的,可以测定生物量。生物量是一项辅助数据,可以获得就最好也获得,可以看看产量的变化是否因为生物量的变化引起的。但是凡事都应该以产量为唯一可比较的指标。还有一个好处是方便产物的提取,渣多不好提取,但是如果只是优化一下实验条件又不用提取的,就别考虑这么多了。
所以我觉得离心是最好的,有的东西离心去不掉,就过滤。但是如果要求不高,那就算了。

 
不产孢子的丝状真菌...第一次听说,LZ能具体说下么...
    LZ的问题是不是其实有两个
  1:接种量无法确定的问题.
   2:发酵过程中测菌体重量的问题
  接种量的问题,其实要看LZ要求的精度有多高了。要是不高的话,个人觉得打饼就可以了,称重感觉比较容易染菌。
  现在我做发酵是先挑一环到两环菌丝到种子培养基中,活化之后再接发酵,接种量是种子培养基的10%或5%,这样保证一批是相同浓度.
   其实最终涉及到的还是要求精度的问题,因为无论采取哪种方法,有些变量都无法控制,譬如打饼的位置,接种菌丝,以及其他一些影响.
   称量菌体的问题,没想到好的办法,不过有人帮忙解决了,嘿嘿.
 
我和LZ是遇到同样的问题,也和LZ交流过,我替LZ解释一下吧,不是不产孢子,而是孢子很难形成,而且产在载孢体里,无法以孢子数作为接种量的量化指标。我有3个问题:
1、如果采用打饼的话如何量化?是否可以说成100mL发酵培养基加入2个、3个菌饼?
2、接种量是种子培养基的10%或5%作何解?是指含菌丝的种子培养基占发酵培养基的10%或5%吗?或是以10%或5%的种子培养基接入发酵培养基。但如果菌丝成团而不分散均匀的话,这个方法似乎不准确啊。
3、中试发酵罐为50升,此时如何确定接菌量?
谢谢cc1000ml 以及楼上各位。
 
1 个人想法:  打饼所谓的量化(接2个或者3个菌饼)只能是相对的,只能保证同一批次的相同,因为平板由于接种等因素的影响,不可能完全相同,所谓的打饼量化应该比较适用于对量化指标要求不高的情况下.
   
2 10%或5%的接种量是针对种子培养基的体积而言,例如:100ML的种子培养基,每个发酵瓶接10ML. 涉及到接种量是否一致的问题,不知道你们的菌是什么情况,我一般是抛弃菌丝体,直接取上清...这样就能保证吸到的是均匀的孢子液。不过这个针对这种孢子很难形成的菌 是否有很大困难.
  
3 现在没有做过上罐实验 所以不清楚了哈
 
我们的真菌确实较难产孢,即使摇床培养1个多月形成载孢体,里面也不一定有孢子,有点邪门。呵呵,不过学习了。

接种一定面积的带菌琼脂块,或者一定重量(换算干重)的新鲜菌丝。目前来说就是这两种个方法。都有文献支持的。
可否给文献的出处?

:)我们的真菌确实较难产孢,即使摇床培养1个多月形成载孢体,里面也不一定有孢子,有点邪门。呵呵,不过学习了。
很多真菌就是不产孢子,也有很多需要在非常严格的条件下才能产生孢子。这类真菌接种时只能接种相当大小的面积的菌落,并且菌落最好用组织研磨器研碎。这种接种方式实际上只对菌块直接接发酵的发酵过程有很大影响。如果你的发酵工艺需要2级种子或者更多级的种子,在种子生长过程中会将菌块大小所造成的接种量误差消除。
 
这个如何做到?
 
静置,菌丝体会沉下去,吸取上清。
或者离心,但是离心速度不能太高,菌丝体一般都在下面,孢子比较轻,在上清。

LZ的问题是不是其实有两个
  
1:接种量无法确定的问题.
   
2:发酵过程中测菌体重量的问题
  接种量的问题,其实要看LZ要求的精度有多高了。要是不高的 ...
我想问下,后来是怎么解决的关于种子液接种到发酵培养基中的问题的,就是种子液的接种量怎么控制(菌丝球会影响接种量)