分子生物学--如有错误概不负责!!发布时间：7/4/2011 12:48:58 AM
DNA修复：错配修复，切除修复，重组修复 DNA转座：存在于染色体DNA上可自主复制和位移的基础单位。转座子Zui初是由Barbara McClintock 于20世纪40年代在玉米的遗传学研究中发明。称玉米夫人
DNA复制：1DNA复制是半保存复制，2复制的把持一般在复制的出发点处，3复制叉的移动是单向的或双向的，4链的延长方向是5′到3′方向，6大多情形下DNA复制为半不持续复制，7在模板存在的条件下，DNA聚合酶以短的RN *** 段为引物开端合成DNA的短片断，8存在各种DNA链的合成起始机制，除了ＲＮＡ引发，另外的一下装置，包括ＤＮＡ链与一个末端蛋白共价结合，以及缺口的共价延长，或者亲本链已被环出的末端，９终止也是在复制过程中的某个固定点，１０复制的机制取决于基因组结构和构象来坚持发生完全的染色体，１１即使在以单一的细胞中也可以进行多种复制机制的操作
ＲＮＡ转录的基础过程：１模板识别，２转录起始，３转录延伸，４转录终止
ＲＮＡ聚合酶：两个α亚基一个β亚基和一个β′和一个ω亚基，称为核心酶。加上б亚基后成为聚合酶全酶。ββ′共同形成RNA合成的活性中心，б因子用于辨认不同的启动子，α用于核心酶组装，启动子识别，ω未知
启动子的基础构造：尽大部分原核生物启动子都存在于-10bp的TATA盒和位于-35bp的TTGACA盒，这两个区域是RNA聚合酶与启动子的结合位点，能与б因子相互辨认而具有很高的亲和力。
终止和抗终止
RNA终止时Zui常碰到的问题是3‘端核苷酸的定位：由于活细胞内部依据终止信号准确终止的RNA与一个经过剪切的RNA的3’端没有两样，都是-OH基团，而研讨5‘时，只有初生RNA上才有三个磷酸基团，任何经过剪切润饰的RNA的5’端不再带有这个基团
依据体外试验中RNA聚合酶是否须要帮助因子参与才干终止RNA链的延伸,可将大肠杆菌中的终止子分为不依赖于p因子和依赖p因子两大类：
一 不依附于p因子的终止
（条件：每个基因或操纵子都有一个启动子和终止子）内在终止子（intrinsic terminator）的两个显明的结构特色：1 终止位点上游一般存在一个富含GC碱基的二重对称区，转录时产生发卡结构；2 在终止位点前面有一段由4-8个A组成的序列，所以转录产物的3‘端为寡聚U，新生RNA的发卡式结构会导致转录的终止，损坏RNA-DNA杂合链5’端的正常结构。寡聚U的存在使杂合链的3‘端部分呈现不稳固的rU。dA区域。两者共同作用使RNA从三元复合物中解离出来。
二 依附于p因子的终止
有些终止位点的DNA序列缺少共性，而且不能形成强的发卡结构，因而无法引诱转录的自发终止。
p因子（六个雷同亚基组成的六聚体）的作用机制是“穷追”模型：RNA合成起始后，p因子即附着在新生的RNA链5’真个某个可能有的序列或二级结构特异性位点上，应用ATP水解发生的能量，沿着5‘―3’方向朝转录泡靠近，其活动速度可能比RNA聚合酶快些，当RNA聚合酶移动到终止子而暂停时，p因子达到RNA的3‘―OH端追上并代替暂停与终止位点上的RNA聚合酶，它所具有的RNA-DNA界螺旋活性是转录产物RNA从DNA上开释，转录复合体解体，完成转录过程。
抗终止
重要有两种方法：
一 损坏终止位点RNA的茎环结构：由于在大肠杆菌中转录与翻译是偶联的，转录产物mRNA形成后立即通过核糖体知道蛋白质合成，当介质中该aa浓度较高时，与此相对应的氨酰-tRNA含量也高，因此核糖体可顺利通过串联密码子。在这种情形下，mRNA形成正常二级结构，其中包括末端的茎环结构，RNA聚合酶终止转录。当介质中该aa浓度较低时，缺少相应的氨酰-tRNA，致使核糖体滞留在串联密码子上，mRNA不能形成二级结构，茎环结构被损坏，因此转录仍能进行下往，呈现转录抗终止现象
二 依附于蛋白质因子的转录抗终止
lengda噬菌体中由N基因编码产生的N蛋白具有抗转录终止作用，但其功能依赖于宿主所产生的NusA,NusB,S10和25000等几种蛋白质，这些蛋白质结合到终止子邻近的DNA位点是实现抗转录的必要条件。该DNA位点中含有A区（CGCTCTTA）和一个二重对称序列，N蛋白能识别后者转录所形成的茎环结构并与之结合。NusA以二聚体的情势存在，其一个亚基与RNA聚合酶结合，另一个亚基与N蛋白结合，当其他3种蛋白都结合到Nut位点时，便形成一个蛋白复合物，并通过NusA与RNA聚合酶结合，转变聚合酶的构象，使之对终止信号不敏感，持续催化RNA链的合成。
原核与真核生物mRNA的特点比拟。
原核生物mRNA的特点：1. 半衰期短。2. 很多原核生物mRNA以多顺反子的情势存在。3. 原核生物mRNA的5’端无帽子结构，3’端没有或只有较短的多聚（A）结构。
真核生物mRNA的特点：1. 真核生物mRNA的5’端存在“帽子”结构。2. 尽大多数真核生物mRNA具有多聚(A)尾巴。
内含子：大多数真核基因都是由蛋白质编码序列和非编码序列两部分组成，编码序列称为外显子非编码序列称为内含子
I类内含子的自我剪切进程：在I类内含子切除系统中，鸟苷或鸟苷酸的3’-OH作为亲核基团攻击内含子5’真个磷酸二酯键，从上游切开RNA链。再由上游外显子的自由3’-OH作为亲核基团攻击内含子3’位核苷酸上的磷酸二酯键，使内含子被完整切开，高低游两个外显子通过新的磷酸二酯键相连。
描写蛋白质的生物合成过程。
要点：蛋白质的生物合成是一个比DNA复制和转录更为庞杂的过程。它包含：①翻译的起始――核糖体与mRNA结合并与氨基酰-tRNA天生起始复合物。②肽链的延长――由于核糖体沿mRNA5' 端向3' 端移动，开端了从N端向C真个多肽合成，这是蛋白质合成过程中速度Zui快的阶段。③肽链的终止及开释。核糖体从mRNA上解离，筹备新一轮合成反映。
.tRNA的种类有起始tRNA，，同工tRNA和校订tRNA；
tRNA功效：重要是携带氨基酸进进核糖体，在mRNA领导下合成蛋白质。即以mRNA为模板，将其中具有密码意义的核苷酸次序翻译成蛋白质中的氨基酸次序
tRNA三叶草构造：为二级结构，由二氢尿嘧啶环、反密码环、额外环和胸苷、假尿苷、胞苷环和氨基酸臂组成
tRNA到L型结构：三级结构，与氨酰tRNA合成酶对tRNA的识别有关
核糖体活性中心：1，mRNA结合部位 2，结合或接收AA-tRNA的部位 3，结合或接收肽基的tRNA部位 4，肽基转移部位 5，形成肽键的部位
抗生素：嘌呤霉素、酰嘌呤霉素、青霉素、红霉素、四环素
蛋白质转运机制：翻译转运同步机制、翻译后转运机制、核定位蛋白的转运机制、蛋白质的降解
DNA操作技巧：克隆、核算的凝胶电泳、分子杂交、细菌转化、核苷酸序列剖析、聚合酶链反响、DNA与蛋白质相互作用研究
什么决议PCR产物的长度与特异性：引物、联合位点
基因敲除：又称基因打靶，通过外源DNA与染色体DNA之间的同源重组，进行准确的定点润饰和基因改革，具有专一性强、染色体DNA可与目标片断共同稳固遗传的特色
RNA干扰是指在进化进程中高度守旧的、由双链RNA诱发的、同源mRNA高效特异性降解的现象。RNAi的作用供给了一种经济、快捷、高效的克制特异基因表达的技巧手腕，有助于研究该基因在生物模型体系中的作用，是研讨基因功效的主要工具，并且逐步成为病毒性疾病、遗传性疾病以及肿瘤等的基因治疗研讨的一种手腕
把持子：指启动基因、把持基因和一系列紧密连锁的结构基因的总称。转录的功能单位。很多功能上相干的基因前后相连成串，由一个共同的节制区进行转录的把持，包括结构基因以及调节基因的全部DNA序列。重要见于原核生物的转录调控
一, 名词说明
1, 基因:能够表达和发生蛋白质和RNA的DNA序列,是决议遗传性状的功效单位.
2, 基因组:细胞或生物体的一套完全单倍体的遗传物资的总和.
3, 端粒:以线性染色体情势存在的真核基因组DNA末端都有一种特别的结构叫端粒.该结构<br>是一段DNA序列和蛋白质形成的一种复合体,仅在真核细胞染色体末端存在.
4, 操纵子:是指数个功能上相干的结构基因串联在一起,构成信息区,连同其上游的调控区
(包含启动子和把持基因)以及下游的转录终止信号所构成的基因表达单位,所转录的RNA为多顺
反子.
5, 顺式作用元件:是指那些与结构基因表达调控相干,能够被基因调控蛋白特异性识别和结
合的特异DNA序列.包含启动子,上游启动子元件,加强子,加尾信号和一些反映元件等.
6, 反式作用因子:是指真核细胞内含有的大批可以通过直接或间接联合顺式作用元件而调节
基因转录活性的蛋白质因子.
7, 启动子:是RNA聚合酶特异性辨认和联合的DNA序列.
8, 增强子:位于真核基因中阔别转录起始点,能显明加强启动子转录效力的特别DNA序列.
它可位于被加强的转录基因的上游或下游,也可相距靶基因较远.
9, 基因表达:是指生物基因组中构造基因所携带的遗传信息经过转录,翻译等一系列过程,
合成特定的蛋白质,进而施展其特定的生物学功能和生物学效应的全过程.
10, 信息分子:调节细胞性命运动的化学物资.其中由细胞分泌的调节靶细胞性命运动的化学
物质称为细胞间信息分子;而在细胞内传递信息调控信号的化学物资称为细胞内信息分子.
11, 受体:是存在于靶细胞膜上或细胞内能特异识别生物活性分子并与之结合,进而产生生物
学效应的的特别蛋白质.
12, 分子克隆:在体外对DNA分子依照即定目标和计划进行人工重组,将重组分子导进适合
宿主,使其在宿主中扩增和滋生,以获得该DNA分子的大批拷贝.
13, 蛋白激酶:是指能够将磷酸团体从磷酸供体分子转移到底物蛋白的氨基酸受体上的一大类
酶.
14, 蛋白磷酸酶:是具有催化已经磷酸化的蛋白质分子产生往磷酸化反映的一类酶分子,与蛋
白激酶相对应存在,共同构成了磷酸化和往磷酸化这一主要的蛋白质活性的开关体系.
15, 基因工程:有目标的通过火子克隆技巧,人为的操作改革基因,转变生物遗传性状的系列
过程.
16, 载体:能在衔接酶的作用下和外源DN**段衔接并运送DNA分子进入受体细胞的DNA
分子.
17, 转化:指质粒DNA或以它为载体构建的重组DNA导进细菌的进程.
18, 沾染:以噬菌体,粘性质粒和真核细胞病毒为载体的重组DNA分子,在体外经过包装成
具有沾染才能的病毒或噬菌体颗粒,才干沾染恰当的细胞,并在细胞内扩增.
19, 转导:指以噬菌体为载体,在细菌之间转移DNA的过程,有时也指在真核细胞之间通过
逆转录病毒转移和获得细胞DNA的过程
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