上光问答
|
上光图库
|
网站地图
|
上光阿里巴巴
|
中文版
|
英文版
|
上海光学仪器厂生物显微镜产品系列
网站首页
产品中心
新闻中心
显微分析
常见问题
企业介绍
企业资质
联系我们
新闻中心
Product
新闻中心
显微分析
常见问题
网站首页
>
新闻中心
生物技巧
发布时间:7/29/2011 9:24:24 AM
绪论
1、生物技术是利用自然科学和工程学的原理依附生物作用剂的作用将物料进行加工以提供产品或用认为社会服务的技术。
生物工程学:跨学科的利用技术学科,是20世纪70 年代初在分子生物学,遗传学,细胞学,微生物学以及生物化学工程和盘算机等学科的基本上发展起来的。应用基因工程、细胞融会、固定化酶以及细胞或组织培育和生物传感器技巧等工程技术原理,加工生物资料或定向的组建具有特定外形的新物种或新品系为人类供给所需的各种产品和服务…其中基因工程是核心。由于只有应用重组脱氧核糖核酸技术,能力真正依照人的意志来改革和组建新生物,才干赋予细胞工程、酶工程和微生物工程等以新的内容
2、生物技术的发展的四个时代:
①经验生物技术时代②近代生物技术树立时期③近代生物技术全盛时代④现代生物技术全盛时期
3、生物技术的发展趋势:①深刻开展后人类基因组成学的研讨,逐步控制人类生老病逝世的自然规律②深刻的开展基因治疗研究③增强各种生物技术新药物的研讨④人类干细胞培养,胚胎工程的远景看好,处于方兴未艾的发展阶段⑤全面转基因动物有看树立“动物药厂”,而通过克隆动物有看树立优种畜生品系和拯救濒临物种⑥加速对人类功效基因的研究开发⑦基因农作物为农作物的优质丰收带来宏大活力⑧增强与环境维护科学的合作研究⑨积极开展海洋生物技术的研讨⑩大发展生物技术相干的工程技术学科的研究。
生物反映进程原理
1、菌种:细菌,放线菌。酵母菌,霉菌细菌(真细菌、古生菌)
2、筛选方法:整体生物,完全细胞,亚细胞试剂
3、选择性分离方法的步骤:①微生物材料的选择②材料的预处置③所需细菌的分离④菌种的培养⑥菌种的选择和纯化
4、资料预处置方法:物理办法(加热过滤离心)化学方法:钓饵法
当样品细胞数较少时通常采取膜过滤法浓缩样品中的细胞。钓饵技术:将固体基质加到土壤或水中,待菌落成长后再展平板。
5、所需菌种的分别效力取决于:分离培育基的营养,ph,参加的选择性克制剂。
6、几丁质培养基:分离土壤和水中和放线菌; 淀粉一酪素培养基:菌落密度大,色素多,细菌易生长;M3培养基:阻滞链霉菌生长,易分离到其他菌属如红球菌。在分离培养中参加抗生素加强选择性;培养重要变量是培养时间
7、菌落选择:展菌法,复印平板法
8、筛选菌株的指标:①菌的养分特点②菌的生长温度③菌对所采取的装备和生产进程的适应性④菌的稳固性⑥菌的产物得率和在造就液中的浓度⑦轻易从培养液中回收产物
9、微生物分离方法:①施加选择压力的分离法a富集液体培养:可以筛选能共生的稳定混合培养物b固体培养基的应用:用于分离酶生产菌②随机分离法:a抗生素生产菌筛选b药理活化性化合物筛选c生长因子发生菌的筛选d多糖发生菌的筛选
10、随着微生物学,生化遗传学的发展,呈现了转化,转导,接合,原生质体融会,代谢调控和基因工程较为定向的育种办法a、自然选育:利用菌种的自然突变进行菌种筛选的过程b、诱变育种:诱变育种的理论基本是基因突变染色体畸变,基因突变。
11、诱变育种的一半步骤
动身菌种→斜面→单孢子悬液→诱变处置→稀释涂平板→挑取单菌落传种斜面→摇瓶初筛→挑出高产斜面→筛种保躲菌种→传种斜面→摇瓶复筛→挑出高产菌株作稳固实验和菌种特征考核→放大罐实验,中试考核→大型投产
12、杂交育种:将两个基因型不同的菌株经吻合使遗传物资重新组合,从中分别和筛选具有新性状的菌株
杂交利用:细菌的杂交,放线菌的杂交育种,霉菌的杂交育种
放线菌常用杂交办法:混杂培养法,平板杂交法,玻璃纸转移法
13、原生质融合技术:把两个亲本的细胞分辨通过酶解作用加以崩溃,使菌种细胞在高渗环境开释出只有原生质膜包着的球状体,两个亲本的原生质体在高渗条件下使之混杂,由聚乙二醇作为助融剂,使他们互相凝聚没产生细胞融合接着两亲本基因组由接触到交流从而实现遗传重组。
14、原生质体融会方式:PEG促融,电引诱促融
15、DNA重组技巧:按人的意志。将某一生物的遗传信息在体外经人工与载体相接,构成重组DNA分子,然后转进另一生物细胞中,使被引入的外源DNA段在后者内部得以表达
16、放线菌的杂交技术:混杂培养法、平板杂交法、玻璃纸转移法
17、选择菌种的起源:①自然资料②可寻找以适应相当刻薄的环境的微生物类群③应用同一生态环境的不同环境条件分离出更多种类的菌株
18、DNF重组技巧的基础进程:①含目标基因DN *** 段的筹备②载体③含目标基因的DNF片断与载体相衔接④将重组分子送进受体细胞,并与其中复制、扩增⑤筛选出带有重组DNF分子的转化细胞⑥鉴定外源基因的表达产物
微生物代谢调节
1、代谢把持机制:酶活的调节,酶配合的调节
2、微生物打至采用三种方法调节低级代谢:酶活性的调节,酶合成的调节,遗传节制
4、酶活性的调节可回纳为:共价润饰、变构效应、缔合与解离和竞争性克制
5、酶合成的调节:引诱作用,分解代谢的阻遏,反馈调节,协同掌握
6、低级代谢是为生物提供能量,合成中间体及要害大分子,如蛋白质、核酸苷的各种相互关联的代谢网络,另一方面,次级代谢重要涉及合成过程,其终极代谢产物对菌的生长不是必须的,对其性命运动可能具有某种意义,通常在生长后期开端形成。
7、次级代谢的特点:①种类繁多,结构特别,含有不常见化合物②含有不常见化学键③一种微生物所合成的次级代谢物往往是一组构造类似的化合物④一种微生物的不同居菌株可以生产分子构造迥异的次级代谢产物⑥次级代谢产物的合成比生长对环境因素更敏感
8、前体:参加到发酵造就基中的某些化合物能被微生物直接联合带产物分子中往,而自身构造无多大变更,具有增进产物合成的作用
9、前体起源①营养转化为中枢道路的中间体②芬芳中间体③经润饰的糖前体④甲基的来源
10、代谢工程:某些特定生化反应的修饰来定向改良细胞的特征或应用重组DNA技术来发明新的化合物
11、微生物发生的次级代谢物有:抗生素、色素、生物碱和毒素等
12、次级代谢物的生物合成包括以下几步:①养分的摄入②通过中枢代谢道路养分转化为中间体③小分子建筑单位的生物合成④如有必要,转变其中的一些中间体⑤这些前体进入次级代谢物合成的专有门路⑥在次级代谢的主要骨架形成后作Zui后的润饰,成为产物
微生物培养基
培育基分类:①按组成的物资纯度:合成造就基、自然培养基②按培养基状况:固体培养基、半固体培养基、液体培养基③按用处:孢子培养基、种子培养基、发酵培养基
2、产业微生物尽大部分是异养型微生物,须要碳水化合物,蛋白质,和前体等物质。提供能量和构成特定产物的须要
3、培养基的成分:①碳源,起源:糖类,油脂,有机酸②氮源:有机氮源(花生粉、玉米浆、尿素)无机氮源(铵盐、硝酸盐类)③无机酸及微量元素④水⑤生长因子、前体、产物增进剂和克制剂
4、狍子培养基:麸皮、小米,大米、玉米碎屑、琼脂斜面(葡萄糖、蛋白肽、牛肉膏、食盐)
灭菌
1、 灭菌:用物理或化学方式杀灭或除往物料或设备中一切有性命物资的国策和那个
灭菌运用范畴:①培养基灭菌②气体除菌③设备及管道灭菌
2、 灭菌的方法:化学灭菌、射线灭菌、干热灭菌、湿热灭菌、过滤除菌
3、 以N/No=-kI→对数残留定律 k值尽对值越大,微生物越易逝世亡
得到的残留曲线不是直线→芽孢起作用 湿度对k的影响:
4培养基的分批灭菌:将配好的培养基放在发酵罐或其他容器中,通入蒸汽将培养基和所有设备一起灭菌的过程。 有升温、保温、降温三个阶段
分批灭菌时间:
若斟酌升温阶段: 保温时间←
5、 连续灭菌:将配好的培养基在通入放酵罐时进行加热、保温、降温的灭菌过程
理论灭菌时间: Co,Cs分辨为单位体积培养基在灭菌前后活微生物个数,实 际维持时间常数常取 理论灭菌时间的3—5倍
6、 分批灭菌:长处:无需专门的灭菌设备,设备投资少,灭菌后果可靠、对灭菌用蒸汽请求低
毛病:灭菌温度低,时光长对培养基损坏大,难遇实现自由把持
连续灭菌:长处:对培养基损坏小,易实现自由节制,进步发酵罐的投资利用率,蒸汽用量安稳
毛病:对加热蒸汽的压力请求较高,设备投资大
7、 无菌空气:将自然界的空气经压缩、冷却、减湿、过滤等过程
尺度:①持续供给必定流量的紧缩空气②空气的压强(表压)为0.2—0.4MPa③进入过滤器之前,空气的相对湿度φ≤70%④进入发酵罐的空气温度可比培养基高10—30℃⑤紧缩空气的干净度,在设计空气过滤器时,一般取失败率为10-3为指标
8、 空气除菌设备及作用:①采风塔:采风②粗过滤器:拦阻空气中较大的灰尘以维护空气压缩机,同时灭菌,减轻总过滤器累赘③空气压缩机:供给动力,战胜随后设备阻力④空气贮罐:打消紧缩空气的脉动⑤冷却器:冷却和降温⑥气液分离装备:除往空气中的水和油,掩护过滤介质,a、旋风分离器:气固、气液沉降分别b、丝网除沫器:除去1um以上的雾滴⑦空气加热设备,加热空气
9、 保温:杀灭微生物的重要过程 装备有:保持罐、管式维持器
10、除菌方式:辐射灭菌法、加热除菌、静电除菌、介质过滤除菌
11、空气的过滤除菌:尽对过滤:介质孔隙<被拦阻微生物、深层过滤:介质孔隙率>被拦截微生物(机理:静电、扩散性及拦阻作用)
12、在试验室或中?范围,空气过滤只设一级、而大型发酵工厂大多工厂二级甚至三级过滤。第一级过滤常称为总过滤,二、三称为分过滤器
设备:①纤维及颗粒状介质过滤器②滤纸过滤器③金属烧传管空气过滤器④微孔膜过滤器——绝对过滤器
种子扩展培养
1、 种子扩展培养:将保留在砂土管、冷冻干燥管中处休眠状况的生产菌种接入试管斜面活化后,再经过扁瓶或摇瓶及种子罐逐级扩展培养而获得必定数目和质量的纯种过程。这些纯种培养物称为种子
2、 种子接种龄:种子罐中培养的菌丝体开端移入下一级种子罐或发酵罐的培养时光
3、 生长快,种子用量比例少的细菌采取一级种子
4、 影响种子质量的因素:原材料质量、培养条件(温度、湿度、通气量)、斜面冷躲时间
5、 保证种子质量办法:菌种稳固性检讨、无杂进菌检讨
6、 需要逐级扩大培养是一位内要使孢子瓶中有限数目的孢子发芽、生长并滋生成大批菌丝作为种子,但对那些生长慢的菌种,一次扩大培养得不到粗壮菌体,故需逐级扩大培养,对于那些生长快的细菌,种子用量比例少,可作为一级种子
7、 作为种子的原则:①菌种细胞的生长活气强,移种至发酵罐后能敏捷生长,缓慢期短②生理性状稳定③菌体总量及浓度能满足大容量发酵罐的请求④无杂菌污染⑤坚持稳定的生产才能
发酵工艺把持
1、 发酵:微生物把一些原料营养在适合的发酵条件下经特定的代谢改变成所需产物的过程
2、 微生物发酵的方法:分批、补料—分批、半持续、持续
3、 分批发酵:粗分四期:适应期、对数生长期、生长稳定期、死亡期
细分六期:①停止期:刚接种后的一段时间,菌对生长环境适应,细胞数目和数目不变②加速期:大多数细胞的比生长速率在短时间内从Zui小开到Zui大③对数期:对数生长期的比速率达Zui大④减速期:随着养分的减少和有害代谢物的积聚从对数生长期进入⑤静止期:生长和死亡的动态平衡,生长速率为0⑥死亡期:生长呈负增加,有害代谢物(次级)在发酵液中大批积聚时进入
4、 依据产物的形成是否与菌体生长同步关联,产物形成动力学分为:生长关联型与飞非生长关联型(一般初代为生长关联,次代为非生长)
5、 分批发酵优毛病:①操作简略、周期短②染菌机遇减少③生产过程产品德量易掌控④不实用于测定其过程动力学⑤对基质浓度敏感的产物,或次级代谢物,抗生素,不合适用分批操作
6、 惯例的发酵条件:罐温、搅拌转速、搅拌功率、空气流量、罐压、液位、补料加糖、油或前体,通氨速率以及补水等的设定和掌握
能表征过程性质的状况参数有:pH、溶氧、溶解CO2、氧化还原电位、尾气O2和CO2含量、基质或产物浓度、代谢中间体或前体浓度、菌浓
7、 Arrennius方程:In u=Ln A-Ea/RT温度对生长速率的影响In Q=Ln A’-Ea’/RT温度对逝世亡速率的影响
剖析:①温度超过Zui适的生长温度、此生长速率开始敏捷降落。原因:死亡率增大②高的死亡活化能Ea阐明死亡率的增添远大于低活化能的生长速率的增长③死亡速率随温度增长的速率远大与生长速率④细胞得率随温度升高而下降,原因是维持生命运动的须要
8、 大多数微生物生长适应pH跨度为3—4个pH单位,其Zui佳生长pH跨度在0.5—1
细菌、放线菌:6.5—7.5,酵母4—5,霉菌5—7,规律:生长Zui适温度高的菌种,PH也相应高
9、 呼吸熵:指生物体在同一时光内,开释CO2与接收氧气的体积之比或摩尔数之比
10、酵母培养过程RQ=1,表现糖代谢走有氧分解代谢道路,仅供生产,无产物形成;RQ>1.1,走EMP门路、天生乙醇,RQ=0.93,天生柠檬酸,RQ<0.7,天生的乙醇被当作基质再应用
11、青霉素发酵中声场阶段:RQ=0.909,保持阶段RQ=1.0,产物形成阶段:RQ=4.0,前期RQ<1
过渡期RQ略增添,由于葡萄糖代谢不仅用于生长,也用于性命运动的保持和产物形成
产物形成:①产物还原性比基质大,RQ增添②产物氧化性比基质大,RQ减小
偏离水平取决于单位菌体应用基质形成产物的量
实际生产测得RQ值低于理论值:发酵过程存在不完整氧化的中间代谢物和葡萄糖以外的碳源
12、分批发酵的原理:分批发酵是一种准封闭式体系,种子接种到培养基后除了气体流通外发酵液始终留在生物反映器内
生物反响动力学及过程剖析
1、 生物反响过程效力决议几个方面:①生物催化剂性能②反应过程的工艺节制、操作条件③反响器性能
2、
①
②
假如酶的总浓度即开端反映时的浓度为e0,则e0=e+c……③
由③得:e=e0-c……④
由①得:k+1(e0-c)s-k-1c-k2c=0……⑤
收拾得:
内容出自:
https://www.swxwj.com
,转载请注明出处
上一篇:
养殖业用的显微镜
下一篇:
LED 灯具尺度系统建设研讨
相关新闻:
暂无
产品中心
36XL学生显微镜
XSP-15CP 倒置生物显微镜
XSP-17CP 倒置生物显微镜
科研级LED三目荧光显微镜XSP-BM18AY
XSP-19CP 倒置生物显微镜
XSP-20CP 倒置生物显微镜
版权所有 上光生命科学分部 上海光学仪器厂 50年显微镜专业研发生产经验,为您提供生物显微解决方案 网站备案:京ICP备09003476号
首页
|
产品中心
|
服务中心
|
新闻中心
|
常见问题
|
联系我们
产品索引:
生物显微镜
图像生物显微镜
双目生物显微镜
示教生物显微镜
生物显微镜价格
单目生物显微镜
三目生物显微镜
倒置生物显微镜
荧光显微镜
相衬显微镜
暗视野显微镜