弓形虫被描述为一个微小的原生??动物的有机体,寄生在脊椎动物,特别是鸟类和哺乳动物的器官生活,并能引起疾病。通过血清学诊断测试,用于检测弓形虫的存在。
这种微生物也是影响眼睛,这就是所谓的弓形虫视网膜脉络膜。当这种情况发生,诊断有症状的基础上,根据类型。这些措施包括积极视网膜脉络膜和视网膜脉络膜非典型。确认的弓形体病的存在时,医生通常需要组织学或核酸扩增技术的直接可视化的寄生虫,如化验。有时也用于活检和在小鼠体内的原生动物的组织培养显微镜下的可视化。
弓形虫的免疫球蛋白和血清中的抗体检查也审议。本文讨论的细胞培养分离的评价和研究组织培养显微镜的放大倍率下,建立弓形虫坏死性视网膜脉络膜炎确诊患者的眼内液中的存在。这项研究是支持眼微生物学系,巴斯科姆帕尔默眼科研究所,安妮贝茨利奇眼科医院,在迈阿密,佛罗里达州迈阿密大学医学院。
从1995年1月1日起期,1998年12月31日,研究人员收集了从患者被诊断非典型或严重的视网膜脉络膜和这些样本,然后培养17眼流体样品。其实,四个具体方法是用于隔离,并确认这些流体样品中弓形虫的存在。在第一种方法,相衬显微镜是用于直接检查。另一种方法,姬姆萨染色涂片油浸利用。还有另一种方法,研究人员使用照明显微镜可视化弓形虫株的细胞壁。Zui后的方法,组织培养显微镜是用来放大文化的人工流体样品。
这项研究的结果,由于微生物与坏死性视网膜脉络膜炎折磨的患者眼内液体弓形虫目前的常规诊断提供了基础。他们的文化的积极成果,也发现有人类免疫缺陷病毒或获得性免疫缺陷综合症患者。
这项研究的一个缺点是事实的患者人数相对较少。这些疾病的一个严重的形式,因此,研究人员假设,那些不太苛刻的症状可能不会有积极的文化测试时。从这项研究中,可以得出结论,人工体液和组织文化的方法是一个严重的非典型性坏死性视网膜脉络膜表现与折磨的患者的诊断非??常有帮助。
像这样和其他旨在提高和改善困难微生物检测所用的诊断方法的实验应该得到支持和鼓励。随着医学科学技术的进展,我们只能希望更先进的方法,将允许医疗专家来诊断疾病,更快,因此使得病人实施早期治疗方式更好的预后。
原文:
弓形虫是一个古老的,有义务的,中枢神经系统,骨骼,及人工组织(4,15,18,24-26,35,40,43)偏爱的细胞内寄生虫。常规诊断先天或后天的弓形体病是由血清。眼内感染,临床诊断,根据症状,活跃的视网膜脉络膜脉络膜视网膜疤痕愈合复发。非典型弓形虫视网膜脉络膜炎,可能会出现在后天的疾病,或在免疫功能低下者模仿坏死病毒性视网膜炎(4,9,25-27,32-35,37,42)。积极的可预测性高的化验非典型病例的理想,以避免视力减退或延误诊断(1,6-10,14,17,19,24,25,31-35,42; D.米勒,电磁佩雷斯, MG迪亚兹,未发表资料)。
目前实验室确认的弓形体病的方法包括(i)直接通过组织学,姬姆萨,或免疫染色或核酸扩增技术检测组织或体液中的寄生虫;(二)在小鼠或组织培养原生动物的隔离; (三)调查抗弓形虫免疫球蛋白M(IgM)的,抗体IgA的,和IgE的血清及人工体液中的抗体。的敏感性和特异性实验室和应用(6,11,15,18,19,28-30,33-35,39-43)之间的可能差别很大。
我们评估确认的坏死性视网膜脉络膜炎的临床诊断患者眼内液体的存在弓形虫细胞培养分离的作用。
十七人工样品收集11例,从1995年1月1日起至1998年12月31日,在诊断为非典型,严重视网膜脉络膜vitrectomies或enucleations,文化提交。人成纤维细胞(MRC - 5;巴特尔斯,Issaquah的华盛顿州)的单分子膜和,体积允许,epitheloid细胞株(A549,巴特尔斯; PMK,VIROMED,明尼阿波利斯,明尼苏达州)接种1?2滴(0.1?0.2毫升)眼内的液体或组织的混合物。细胞系(管)均保持在2.5至3毫升辅以3%热灭活小牛在CO2培养箱牛血清30天的准备组织文化媒体或直到检测弓形虫速殖子或斑块细胞病变效应(7)。从管现货涂片至少有25%的细胞病变效应。以上所述接种弓形虫ATCC 40050(马里兰州Rockville的美式文化的收集,)的细胞系阳性对照幻灯片。从模拟接种管涂片阴性对照。
四种方法识别和确认弓形虫从组织文化的单层隔离。这些包括(i)直接检查相衬倒置显微镜× 20 ??× 40(二)检查(HEMA 3,生化公司,Swedesboro,新泽西州),姬姆萨染色× 20现场涂片和× 100下浸油,包括弓形虫ATCC 40050和未接种单层的准备斑涂片控制;(三)与一个IgG荧光共轭(Virostat,缅因州波特兰)免疫荧光检测RH株速殖子对细胞壁的指示弓形虫;及(iv)原始样本和阳性患者的培养上清液的扩增,引物设置对弓形虫B1基因从Genmed生物技术公司(南旧金山,加利福尼亚州)执导,如前所述,(一个194 bp的产品的存在标志着一个结果与目标DNA序列相一致。)
“人工抗体(IOAb)滴度测定病理参考实验室,大学迈阿密的医院和诊所,佛罗里达州迈阿密
弓形虫速殖子被收回的17个样品(见表1)7。检测时间为2至23天(图1),平均12天。寄生虫出现明亮refringent,7 - 8微米,月牙形的生物单独或集群。没有病毒的病原体被隔离在初始或后续的段落。五(45%)患者具有积极的弓形虫视网膜脉络膜的Zui终诊断,积极文化的预测值分别为100%(5)。其余患者Zui后诊断为淋巴瘤(2例),巨细胞病毒(CMV)视网膜炎(3例),无效(愈合)弓形虫感染(1例)。从这些病人的样本中分离出无寄生虫。
Antitoxoplasmic IOAbs球蛋白(IgG)六(54%)患者进行评估。 IOAb滴度和Zui后诊断之间的相互关系是四个六,或67%。
滴度分别为三四个培养阳性检查的病人(75%)呈阳性反应。我们确认我们的弓形虫菌株用于PCR扩增。弓形虫DNA被发现在原样品和所有培养阳性的患者的细胞培养上清。
一些报告已经证实,从本地化nonocular体液和组织,其效用弓形虫快速分离的价值,以验证临床印象时,血清学检测结果(1,2,8,12,16,22)。尝试恢复眼内液体弓形虫的报道。这些大部分已被接种到小鼠死后液体或摘除组织(8,10,12,21,22)。小鼠隔离被认为是“金标准”,但该技术是繁琐,费时,成功是由变量的小鼠的易感性,感染寄生虫的毒性,和的路线和剂量的接种影响。 Deouin和他的同事发现组织文化的敏感性,相当于小鼠接种1到100的寄生虫(13)。
我们的研究结果提供了弓形虫常规检测眼内液体由于弓形虫坏死性视网膜脉络膜炎患者的第一次报告。所有培养阳性的结果是由人类免疫缺陷病毒阳性或艾滋病患者。我们的平均12天的检测时间是长于文学检测弓形虫脑炎或原虫的情况下(3,22,36,38)报道的恢复时间。这可能是由于部分样品的体积(0.1至0.5毫升),而不是管壳瓶或微孔板,部分是因为用于检测。
弓形虫DNA通过PCR也证实,在所有培养阳性的情况下眼内液体。 PCR技术已用于检测患者弓形虫脑炎和肺和先天性的疾病(7,12,20,23)的组织和体液中的弓形虫抗原。另一些调查,在眼组织和体液(2,5; D.米勒,JL戴维斯,WW Culbertson,SC Pflugfelder,和D尼科尔森,临床Virol症状的,抽象的,1993年。)直接检测。在一系列的300房水样本中,Dupon和他的同事发现,部分由于体积小(0.1?0.2毫升)(16??),该技术的灵敏度是有限的。
这项研究的限制之一是,少数患者。不太严重的疾病患者,由于严重的坏死性视网膜脉络膜只患者被纳入,可能是不太可能有积极的文化。然而,不太严重的疾病患者很少需要辅助测试。人工体液和组织的文化似乎是严重的,非典型的坏死性视网膜脉络膜炎患者一个非常有效的诊断手段。