生物药品分析发布时间：7/4/2011 12:50:05 AM
生物药物：生物药物是从生物体分离纯化所得，用于预防、治疗与诊断疾病的生化基础物质，以及用化学合成、微生物合成或现代生物技巧制的的这类物质。 湿点法：是将载好的滤纸全体浸入枸橼酸盐缓冲液（PH=3.0）中，湿润后，取出，用滤纸吸干过剩的缓冲液，置电泳槽架上，使起始线靠近阴极端，将滤纸两端浸入缓冲液中，然后用微量法注射器精密点加供试品试液，每点10ul，共三点，共留2个空缺地位。
干点法将供试品溶液点于滤纸上，吹干，再点，重复数次，直至点完规定量的供试品溶液，然后用喷雾器将滤纸喷湿，点样处Zui后喷湿，本法实用于稀的供试品溶液。
抗原：能引诱机体产生免疫应答，并能与相应抗体或T细胞受体发生特异性免疫的大分子物资
抗体:是机体经过抗原刺激由免疫活性细胞产生的一组免疫球蛋白，是高级动物在抗原刺激下，由浆细胞产生的一类能与相应抗原在体内外发生特异性联合的免疫球蛋白。
免疫原性：抗原被注射入适合的动物体内后，能促使动物产生循环抗体或转变免疫细胞的反应性，即具有免疫原性。
抗抗体：抗体本身可作为抗原往刺激一种生物，产生相应的抗体，称为抗抗体。
抗原特异性：指具有能与特异抗体作用的性质
全抗原：同时具有免疫原性和抗原特异性的物质
半抗原：只能与特异抗体作用但不能引起机体免疫应答的简略分子
非特异性免疫：在生物长期进化进程中形成的，属于先天即有，相对稳固，无特别针对性的对付病原体的才能。
特异性免疫：是机体在性命过程中接收抗原性异物刺激，如微生物沾染或接收疫苗产生的，又称获得性免疫，具有获得性，高度特异性和记忆性。
细胞免疫：机体在抗原刺激下，一类小淋巴细胞（应激胸腺的T细胞）产生增殖分化进而直接攻击靶细胞或间接开释淋巴，以施展其免疫作用。
体液免疫：机体受抗原刺激后，起源于骨髓的小淋巴细胞（B细胞）进行增殖并分化为浆细胞，由它合成抗体，并开释到体液中，并施展其免疫作用。
抗原决议簇：又称抗原表位，指位于抗原表面，可决议特异性的化学基团。
效价：又称滴度，指某一物质与必定容量的另一物质发生反响所须要的量。
凝聚反响细菌红细胞或表面带有抗原的乳胶颗粒等都是不溶性的颗粒抗原，当与相应的抗体联合，抗原与抗体的联合会形成凝聚团块，即凝聚反映
生物检定法：利用药物对生物体（整体动物或离体组织，微生物组织等）的作用以测定其效价或生物活性的一种丈量工具。
终点测定法：以待测物质为底物的酶反应中，假如使底物能够接近完整地转化为产物，而且底物或产物又具有某种特点性质，通过直接测定转化前后底物的减少量、产物的增添量或辅酶的变更等就可以测定待测物。这种方法称为终点测定。
新生物制品：是指我国未同意上市的生物制品，已同意上市的生物制品当更换制品疫苗和生物技术产品的菌毒苗。细胞株及其他重大生产工艺改造对制品的安全性，有效性可能有明显影响时也属新生物制品范畴。
1.生物药物分析的程序：取样、辨别、检讨、含量测定、检测报告。
2.药典的重要内容：包括凡例、正文、附录与索引。
3.核算相干数据库网址：www.cnki.nlm.nih.gov/genkank/index/.html
4.纸电泳法点样分：湿点法和干点法
5.高效液相色谱仪：输液系统、进样系统、色谱柱体系、检测系统、数据记载处置体系
6.物资的抗原性两个含义免疫原性和抗原特异性
7.免疫应答三个阶段：感应阶段、增殖分化阶段、效应阶段
8.抗原抗体的一般规律：特异性、可逆性、定比性、阶段性、条件依附性
9.质谱分析技术分为四种：电喷雾质朴技术，基质帮助激光解析附质谱技术，快原子轰击质谱技术，同位素质谱技术。
.10.所有氨基酸均能与茚三酮显蓝紫色，也称为茚三酮显色法。
11.影响泳动度的因素有带点颗粒的性质、电场强度、溶液的PH值、溶液的粒子的强度、电渗作用
12.分析质量把持中惯例质量节制包括空缺对比和尺度曲线绘制（5个点）。
13.常用于药物分析的方式有：酶法分析、电泳分析、免疫剖析法、高效液相色谱法、生物资谱法、生物检定法六种
下面三个自己领会一下：
琼脂糖浓度：8%~0.3%，若分离低于100bp的用3%的琼脂糖凝胶。
电泳速度又快到慢：闭环>线行>开环。
随电压的升高而减小。
14.电泳技术按支撑物分：纸电泳，醋酸纤维素薄膜电泳，淀粉凝胶电泳，琼脂糖凝胶电泳，聚苯稀酰胺凝胶电泳。
15..核酸在琼脂糖凝胶中的电泳迁移速率取决于琼脂糖浓度，核酸分子的大小，以及核酸分子的外形等三个因素。
16.聚丙烯凝胶电泳是以聚丙烯酰胺凝胶作为支撑介质的电泳办法。其分别后果取决于分子所带电荷与分子大小的比例，以及分子大小有关的分子筛选效应。
17.抗体分类多克隆抗体，单克隆抗体，重组抗体。
18.电泳中常用的唆使剂是溴酚蓝。
二、简答&阐述
(一) 请阐述生物制品的质量检定
1、 物理性质检测：
1）外观检查：特定的人工光源检查透明度，对外观不同的制品（透明液、冻干品、混悬液）有不同的要求，制品外观异常往往涉及制品的安全与效率，因此必需认真进行检讨（高低的一致性）2） 真空度及溶解时光：冻干品真空封口，可用高频火花检定器检查其真空水平，凡有真空度者，瓶内应呈现蓝紫色辉煌，取一冻干制品，加适量溶剂检查溶解时光，溶解速度应在规定时间内
2、 蛋白质含量测定：类毒素抗毒素血清制品基因工程产品等须要测定蛋白质含量以检查
其有效成分。从而盘算纯度与比活性。目前Zui常用的办法为紫外接收法(核酸蛋白浓度检测仪)
3、防腐含量测定：生物制品在制作进程中为脱毒、灭活与防止灭菌污染，常加适量苯酚、甲醛氯仿、汞制剂作防腐剂或灭活剂，含量应节制在限度内，故应把持含量。
4、纯度检验：精制抗霉素、类毒素、血液制品及经精制提纯后请求检讨其纯度是否到达请求，通常采取采取区带电泳、免疫电泳，凝胶层析及其它层析技巧。
5、其他检测项目：（水分含量测定）AL(ON)3（可形成网孔状构造，一定范畴内不会沉淀，疫苗可均匀疏散于AL（OH）3形成的网状构造中被机体迟缓接收，加强持久免疫后果）H3PO4与P
2、生物制品的安全鉴定检定：
1）一般安全检查：安全检验、无菌检验、热源菌检验2）杀菌、脱毒、灭活与脱毒情形的检查：灭活疫苗、类毒素制品，常用甲醛与苯酚做杀菌剂与灭活剂，这类制品的菌毒种多为致病性强毒微生物，若未被杀逝世或解毒不完全，会在使用时发生严重事故，因此需要进行野毒检查、解毒实验与残余毒力试验等安全性检查3）外源性污染检查：野毒检查、支原体检查、参与细胞DNA等的检查4）过敏性物质的检查
3、生物制品的效率检测：应用生物体检定待测品的生物活性及生物效价的一种方式，以生物体看待侧药品的生物活性的反应为基本，以生物统计为工具，应用特定的的试验设计，通过字迹自豪待考试品与相应的尺度品或对比品在必定条件下发生的特定生物反映计量间的差别来测得待测品的效价。
1） 动物掩护实验：将疫苗类毒素免疫动物之后，再用同种的活毒活菌或毒素攻击法，从而判定制品的维护程度。2） 活疫苗的效率测定：A、 按制品装量加稀释液十倍十倍稀释，有Zui后几个稀释度（估量接种后可长出1~100个菌）区必定量菌液涂布接种于合适培育基上，培育后记取菌落数并盘算活菌率。B、 活疫苗低毒测定：常用组织造就法或鸡胚沾染法测定，活疫苗常以病毒滴度表现其效力（半数鸡胚致逝世量）C、 血清学试验：a、 用处：检测抗原半抗原效价b、 定义：系指体外抗原抗体实验、抗原抗体反响，有高度特异性已知抗原可知抗体，反之亦然。c、 机理：预防用生物制品免疫动物后，可刺激机体发生相应抗体，抗体形成程度也是反应生物制品德量的一个方面。
(二) 酶循环放大分析法：
答：物质A在酶a(Ea)和底物a(Sa)的存在下转化为物质B，同时天生产物a(Pa)物质B又在酶b(Eb)和底物b(Pb)的存在下转化为物质A。同时产生产物b(Pb)。上述反应每循环一次。将耗费与物质A等量的Sa和Sb，同时天生等摩尔的Pa和Pb；因此在一定的时光内，循环反应次数即Sa和Sb消费或Pa和Pb生成相当于物质A（或物质B）的倍数，通过检测Sa或Sb的较少或Pa或Pb的生成绩可以进步检测物质A（或物质B）的n倍敏锐度。
酶循环放大分析法的条件：1.物质A和B的浓度与酶a和酶b对底物Sa和Sb的km值相比拟，应相当小。 2.酶a和酶b对底物Sa和Sb的km值应相当小，对底物应有高亲和力。
(四) 等电聚焦机理：等电聚焦就是在电泳槽中放入载体两性电解质，当通入直流电时，两性电解质即形成一个由阳极到阴极逐步增添的PH值梯度，当蛋白质放进此系统时，不同的蛋白质即移动到或聚焦于与其等电点相当的PH值地位上。
(五) 酶联免疫吸附法（ELISA）的原理：将抗原抗体反应的特异性与酶对底物高效催化作用结合起来，依据酶作用底物后显色，以色彩变更断定实验结果，可借酶标测定仪做定量分析，敏感度可达ng水平。 （P131） 酶联免疫吸附法的实验步骤概括为：包被，洗涤，与特异性抗体反应，与酶联抗体反应，显色和测定等步骤。 ELASA实验技术重要包括直接法，间接法和双抗夹心法。
(三) 论述论文发表：
书写药物剖析论文，一般情形下，都按温哥华论文写作格局：标题；作者姓名单位；摘要；要害词；引言或前言；资料与方式；成果讨论；小结或结论；参考文献。
1、标题：拟定正确表达研究内容，反应研究范畴和深度，简练无过剩文字20个字内为宜，太长可用副题目，不可有标点，避免应用疑问性文题 2、署名：应属作者真名与真实工作单单位。体现义务、结果回属便于后人追踪研讨 3、摘要：为了让读者懂得文章大意，是正文的高度浓缩，现多倡导采用结构式摘要。A目标B方法C结果D结论，用第三人称，不分段 4、要害词：也叫索引词一般以3~5个为宜，运用学术词汇 5、引言或前言：包含论文涉及问题的背景， 国内外对这个问题的研究的概况、研究价值、写本文的意义，一般300字即可。 6、资料与方法：研究的科学性体现为可反复性。必需交代所用材料和方法，众所周知的写出出处，开创或改良的方法应：
7、实验结果：多数由数据表达，收拾应紧扣主题，尽量采用科学术语应包含实验数据和每个验证参数的盘算 8、讨论：包含 A：以本试验研究的成果与国内外进行比对，找出异同点，并且对原因进行讨论 B：对本实验研讨做进一步施展和论述，表达作者看法 C：对本实验研讨的意义‘价值和利用作出估量，以表明研究所具有的程度 D：提出尚存在的问题，实验方法的不足之处及显明毛病，对今后待解决的问题和对课题的展看
请求：不离题，逻辑性强，不过多引述而缺少自己观点 9、小结或结论：明白成果写出确实结论，简练。致谢领导者，技巧协助者、供给特别试剂者、经费援助者和提出主要看法者 10、参考文献：引用参考文献出处。往往是作者近年浏览与论文关系亲密的文献，除文献综述，不应超过20条。教科书和一般参考书可不列出。
(六) 阐述抗血清如何制备？
答：抗血清，通常指人工被动免疫后所制成的多克隆抗体，它是免疫分析中的主要工具。抗血清也称为免疫血清，要获得一种质量好的抗血清，重要有免疫原的制备、动物免疫、放血、抗血清分离及抗血清的分析鉴定等步骤。1.免疫原的制备：免疫原是人工将抗原制成能刺激机体引起体液及细胞免疫反映的物质。免疫原由质量较好的抗原与佐剂制成，常用的免疫原有水剂、福氏完整佐剂和福氏不完整佐剂三类。2.试血：家兔的试血通常可由耳缘静脉取血，取血前可用酒精搓擦兔耳，使其血管扩充，如后果不佳，可采取丙酮替换酒精搓擦，也可改由耳中间的动脉取血，试血的血量在0.5ML左右，取血后，待全血凝固后分别血清应用。3.免疫动物血液的采集及抗血清的分离：免疫血清的效价上往后，抗血清的采集有部分采血和杀逝世动物一次性放血。采血时注意无菌操作，尽可能将血放进面积较大的无菌容器中，先室温凝固30min左右,再放入37度的温箱中使之凝固，Zui后放进4度冰箱过夜。越日汲取血清，将血块用无菌玻璃棒轻轻剥离并搅拌，5000r/min离心5min,再汲取血清。
(七) 简述质谱剖析的基础原理。
答：用于分析的样品分子或原子，离子源中离化成具有不同质量的单电荷分子粒子或碎片粒子，这些单电荷粒子在加速电场中获得雷同的功效，并形成一束粒子，进进由电场和磁场组成的分析器，离子束中速度较慢的离子，通过电场后偏转大，速度快的偏转小，当两个场的偏转作用彼此补偿时，他们的轨道便相交于一点，与此同时，在磁场中还能产生质量的分别，这样就使具有同一质核比而速度不同的离子聚焦在同一点上，其焦点接近于平面，在此处用监测体系进行检测，即可得到不同质核比的谱线，即质谱。
(八) 试述影响泳动度的因素有哪些？
答：不同的带电颗粒在同一电场中泳动的速度不同，常用迁移率来表现。迁移率是指带电颗粒在单位电场强度下泳动的速度。影响因素有：1.带点颗粒的性质：一般来说，颗粒带静电荷多，直径小而接近于球形，则在电场中的泳动速度快，反之则慢。迁移率还与分子的外形，介质粘度，颗粒所带电荷有关，迁移率与颗粒表面电荷成正比，与介质黏度及颗粒半径成反比。2.电场强度：电场强度也称点位梯度，一般，电场强度越高，带电颗粒移动速度越快。依据电场强度大小，可将电泳分为常压电泳和高压电泳，前者的电压在100~500V，电场强度一般是2~10V/cm;后者电压可高达500~1000V，电场强度在200~2000V/cm。3.溶液的PH值：溶液的PH值决议了带电颗粒解离度，也决定了物质所带静电荷的多少，对于蛋白质，氨基酸等两性电解质而言，溶液PH值离等电点越远，颗粒所带的静电荷越多；电泳速度越快；反之则慢。4.溶液的离子强度：溶液的离子强度是另一个主要选择的条件，在坚持足够缓冲才能条件下，离子强度要Zui小。溶液的离子强度越高，带电颗粒泳动速度越慢，反之越快。通常缓冲液离子强度选择在0.05~0.1mol/L之间。5.电渗作用：所谓电渗就是指在电场中液体对固体支撑物的相对移动。
（九）生物药物发展的三个阶段是什么？
1、第一代生物药物是应用生物资料加工制成的含有某些自然活性物质与混杂成分的粗提物试剂，如脑垂体后叶制剂、肾上腺素提取物、眼制剂、混杂血清；
2、第二代生物药物是根据生物化学和免疫学原理，运用近代生化分离纯化技术从生物体制取的具有针对性治疗作用的特异性生化成分，胰岛素、疫苗
3、第三代：生物药物是利用生物工程技术生产的自然生理活性物质，以及通过蛋白质工程原理设计制作的具有比天然物质活性更高活性的相似物，或与自然物质构造不同的全新的药里活性成分。如基因工程细胞白介素（IL）、红细胞天生素（EPO）。
（十）酶分析法在生物药物分析中的利用（两个方面）：1.以酶为分析对象，依据须要对生物药物生产进程中所应用的酶和生物药物样品所含的酶进行酶的含量或酶活气的测定，成为酶分析法。 2.应用酶的特色，以酶作为分析工具或分析试剂，用于测定生物药物样品中用一般化学办法难以检测的物质，如底物.辅酶.克制剂和冲动剂（活化剂）或帮助因子含量的方法成为酶法分析。
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