整天做RACE,PCR就是不出东西,整天重复,这算工作量吗?
本人从事分子实验,(PCR),主要是克隆一种植物中的一个酶的未知基因,先前从未有人研究过这种植物中的这个基因。之前做PCR,出来一段基因序列,经过序列相似度比对,确定是这个基因中的一段。然后,做RACE,但做了很长时间都没有东西出来,后面还要构建表达载体,做原核表达------- 哎!这不快毕业了吗!急呀!!!!! 后来跟导师交流,导师说做不出来没关系,只要工作量够了就可以毕业。 我就在想了,这个做分子的工作量怎么算呀? 整天做RACE,PCR就是不出东西,整天重复,这算工作量吗? 如果不算的话,那做分子的什么才算工作量? 我应该怎么攒这个工作量?
做分子的结果容易出,但也不容易出。。。。。做分子主要是实验周期不是特别长,所以工作量的话,就听你们导师的吧,你导师不着急,你就不用着急。或者跟导师交流一下。。。。本科毕业很水的。。。。。。
这种新基因的克隆有时候就是这样的,为了保证能克隆出来,Zui好手头同时做几个基因的克隆。
以前我也出现过这种拿不到全基因的情况。当时我在NCBI里面找了好几个和我这个菌亲缘性很近的全集因组测通的种,然后对比这个基因及其上下游基因的同源性。一般如果亲缘性很近,那么他们基因同源性和基因排布方式都差不多,我用已有的片段设计引物,和上下游基因内部保守序列的引物对扩,拿到了目标基因上下游序列,也没有做RACE。植物应该内含子比较多,但是也可以一试。仅供参考。
我还在想呢,一般的本科生论文谁着急啊。不过硕士的话,楼主建议你好好跟导师沟通沟通哦,别到时候延期就老火老
以前我也出现过这种拿不到全基因的情况。当时我在NCBI里面找了好几个和我这个菌亲缘性很近的全集因组测通的种,然后对比这个基因及其上下游基因的同源性。一般如果亲缘性很近,那么他们基因同源性和基因排布方式都 ...
可能引物设计存在问题,我以前做过从一株粘红酵母里面拉出一段未知的羰基还原酶基因,引物的设计十分关键。可以尝试利用已知片段作为引物通过walking拿到更多的片段,Zui好做ORF分析,祝楼主顺利毕业!
我看我们实验室有个人做RACE据说只要有结果 只要你会YY就能分析很多的
你可以把拿到的序列从生信方面分析下 就是所谓的预测 看看啊好写
我看我们实验室有个人做RACE据说只要有结果 只要你会YY就能分析很多的
你可以把拿到的序列从生信方面分析下 就是所谓的预测 看看啊好写
RACE不出来的问题,不知道这个基因有没有表达特异性啊,比如只在某个组织中表达,在其他组织里就是扩不出来。
工作量肯定是不好攒的,也不是做多态,微卫星什么的,所以说认真做实验才是王道。所以建议一下:
既然可以比较序列相似度,所以你就在其他物种中有这个相似的序列,那么就找那个相似度Zui大的来设计引物,多设计几条,然后来拉全长。
此外,因为有了部分序列,可以设计荧光定量引物,对其在不同组织,器官,部位,以及不同生长时期的表达量进行荧光定量,然后研究是表达趋势或者规律。这样做下来,那个工作量也蛮多的了。
工作量肯定是不好攒的,也不是做多态,微卫星什么的,所以说认真做实验才是王道。所以建议一下:
既然可以比较序列相似度,所以你就在其他物种中有这个相似的序列,那么就找那个相似度Zui大的来设计引物,多设计几 ...
我也是一直RACE,就是不出来,急惨了都
我看我们实验室有个人做RACE据说只要有结果 只要你会YY就能分析很多的
你可以把拿到的序列从生信方面分析下 就是所谓的预测 看看啊好写
RACE有那么难P吗
或者你查查有没有人之前做过这个 先把别人做的建个库 然后跟你自己的结果对比 虽然一条少了点 总比没有结果好吧