相衬显微镜的负相衬与正相衬的区别

相衬显微术负相衬与正相衬的区别

我们知道，在普通镜检情况下产生的相位差不能为人眼所能分辨。如图所示，被检物体小粒子的光程，一般要比周围大，所以通过小粒子的光比周围的光相位被推迟，因小粒子的衍射比直射光的速度大约低1/4波长。虽然直射光A与衍射光B形成合成波C，但因合成波的振幅与直射光相似，所以小粒子的象与背景之间不能形成明暗的反差，结果很难观察到小粒子象的存在。

普通镜检下的光的干涉

在相衬镜检时，由于相板镀膜情况的不同，则有不同的镜检效果。如采用负相衬物镜时，由于相板的共轭面不仅镀有吸收膜，而且还镀有相位膜，除了吸收直射光使其振幅减小外，而且也把直射光的相位推迟1/4波长，这样使直射光与衍射光维持同一相位，则合成波等于直射波与衍射波振幅的和（相长干涉），因背景只有直射光的照明，而小粒子的象则比背景明亮。因此，负相衬的效果是“暗中之明”又称“明反差”。

负相衬镜检下的明反差

相反如用正衬物镜，由于相板的共轭面只镀有吸收膜，补偿面则镀有相位膜，这样直射光仅被吸收，振幅减少，相位未被推迟；而衍射光的相位则被推迟1/4波长，使其与直射光的相位相差1/2波长，合成波的振幅等于两波振幅的差（相消干涉），这时小粒子的象要比背景黑暗。因此，正相衬的效果是“明中之暗”，又称“暗反差”。

正相衬镜检下的暗反差

上述是被检物体小粒子的折射率大介质折射率的情况，如果它的折射率小于介质时，效果则完全相反。
为了更好地发挥相衬镜检的效果，还应注意以下几个方面：
1）光源要强，因环状交阑遮掉大部分光源，同时应将视场光阑和孔径光阑完全开启；
2）为了获得良好效果，应使用波长范围窄的近于单色的光源，相位的变化常因照明光线的波长而不同。通常采用绿色滤光镜来调整光源波长，Zui好按厂家专用相衬镜检的绿色滤光镜进行镜检；
3）切片不能太厚，以5-10ｕｍ左右为宜，否则将引起其它光学现象，而影响成象质量；
4）载玻长、盖玻片的厚度应符合标准，且不应有疵痕，制片的封固剂应均匀一致。