拮抗菌筛选的方法及其操作过程
拮抗菌筛选的方法及其操作过程
我有几个问题想请教下：
第一：拮抗菌分离时，要分离多少株啊，我看文献是有的分离了好几百株，也有的就几十株，我想问一下，这个有什么标准吗？
第二：就是拮抗菌筛选的方法，如平板对峙法，纸片扩散法，牛津杯法，琼脂扩散法等，能否告诉一下具体的操作过程啊，Zui好是详细的，（一般介绍文献上有，但不具体），想请高人指点，要是有关于此操作的视频，就更好了。
第三：文献中还出现过双层平板筛选法，想知道其原理和优势及其适用对象。
首先，你要明白一点，筛菌没有固定的数量，带有一定的偶然性，当然你方法好的话，筛选的次数少，晒出来的几率大。一般筛需要上百株，报道几十株的也许有之，也许。。。
其次，筛菌要有耐性，要多观察，积累经验。
具体选方法或方案看你的菌的特性而定，其实平板对峙法，纸片扩散法，牛津杯法，琼脂扩散法目的一样，就是找出Zui好判断你菌效果的方法，使其一目了然就可看出明显区别，好为下一步实验做准备。至于具体操作，一般实验书上就很详细了。你Zui好在操作前自己列出实验步骤，更具具体实验边做边修改，等你做一两次，就会很熟练了。
另外，关于“平板对峙法，纸片扩散法，牛津杯法，琼脂扩散法的”实验书，您能推荐几本吗，由于以前是做环境微生物的，对于拮抗菌的筛选，还没涉及过，对这些方法的操作注意细节不是太清楚，如：牛津杯是插入琼脂还是直接放到上面啊？还有用打孔器转接“拮抗菌的琼脂块”是放到PDA培养基上面还是先用打孔器在PDA也打孔，然后再将“拮抗菌的琼脂块”放到已打好的孔中啊？您若是了解或是做过，还请多多指导，谢谢！
还有双层平板法，你是否用过，能否说一下其原理啊？这个我还不太明白。它与“平板对峙法，纸片扩散法，牛津杯法，琼脂扩散法的”有什么区别啊？以及其试用对象，这个有实验指导书吗，或是给我些资料什么的，我自己去看看？
问的是不是有些多啊，还请您多多指导！谢谢！
做拮抗试验选用牛津杯法即可.是将拮抗菌的琼脂块放到PDA培养基上面,稍压贴在平板上,然后培养.
双层平板法，Zui初是用于检测噬菌体的,用该法可以直观地看出噬菌体的侵染情况.原理::噬菌体的效价即1mL样品中所含侵染性噬菌体的粒子数。效价的测定一般采用双层琼脂平板法。由于在含有特异宿主细菌的琼脂平板上，一般一个噬菌体产生一个噬菌斑，故可根据一定体积的噬菌体培养液所出现的噬菌斑数，计算出噬菌体的效价。此法所形成的噬菌斑的形态、大小较一致，且清晰度高，故计数比较准确，因而被广泛应用。
平板对峙法和纸片扩散法: 主要用于纯品的抑菌试验,区别在于对峙法抑菌剂和目标菌不接触，
牛津杯法(直接测发酵液):以无菌操作在培养基表面直接垂直放上牛津杯（内径6mm、外径8mm、高10 mm的圆形小管，管的两端要光滑，也可用玻璃管、瓷管），轻轻加压，使其与培养基接触无空隙，在杯中加入待检样品（发酵液），牛津杯一般可以装240微升,勿使其外溢。加满后置37℃培养16-18小时，观察结果，抑菌圈用尺直接量就可以。在培养中,一方面试验菌开始生长，另一方面抗生素呈球面扩散，离杯越近，抗生素浓度越大，离杯越远抗生素浓度越小。随着抗生素浓度减小，有一条Zui低抑菌浓度带，在带范围内，菌不能生长，而呈透明的圆圈，这就叫“抑菌圈”。抗生素浓度越高，抑菌圈越大。
双层平板法(主要检测噬菌体) 先在培养皿中倒入底层固体培养基，凝固后再倒入含有宿主细菌和一定稀释度噬菌体的半固体培养基。培养一段时间后，计算噬菌斑的数量。 方法:双层琼脂平板法 1 倒下层琼脂 融化下层培养基，倒平板（约10mL/皿）待用。 2 倒上层琼脂 融化上层培养基，待融化的上层培养基冷却至50℃左右时，每管中加入敏感指示菌 (大肠杆菌) 菌液0.2mL，待检样品液或上述噬菌体增殖液0.2～0.5mL，混合后立即倒入上层平板铺平。 3 恒温培养 30℃恒温培养6～12h观察结果。 4 观察结果 如有噬菌体，则在双层培养基的上层出现透亮无菌圆形空斑——¬¬¬¬噬菌斑
做拮抗试验选用牛津杯法即可.是将拮抗菌的琼脂块放到PDA培养基上面,稍压贴在平板上,然后培养.
双层平板法，Zui初是用于检测噬菌体的,用该法可以直观地看出噬菌体的侵染情况.原理::噬菌体的效价即1mL样品中所含侵染性 ...